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某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V-P（+）反应。

• 牛肉浸汤不能用于V-P试验，因为在肌肉浸出物中含有乙酰甲基甲醇、丁二酮或其它干扰试验的物质，可造成假阳性。
  
• V-P试验阳性菌偶尔也会不出现阳性反应，为避免此情况，可将加有试剂的培养物于50℃左右轻微加热，阳性菌即出现红色，而真正阴性菌仍保持原色。
  
• 在通用培养基中，一般培养1～3天多数会出现阳性反应，如果培养时间过长，可能因产酸而使V-P反应减弱或造成假阴性。
  
• 一般来说，V-P试验和甲基红试验多呈相反结果。但应注意是这也不是绝对的，有少数细菌如蜂房哈夫尼亚菌和奇异变形杆菌有时两试验均会出现阳性反应。
  
• V-P试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽孢杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐会阻碍乙酰甲基甲醇的产生，故应省去或用氯化钠替代。
  
• 关于V-P试验培养物的培养温度，一般采用35℃或37℃，但有学者认为37℃培养常使分解乙酰甲基甲醇的酶失去活性，故主张采用28～30℃培养，夏季可培养于室温。已知有少数细菌，如哈夫尼亚肠杆菌，在37℃培养的V-P试验结果常不稳定，需在25～30℃培养，才能获得可靠结果。

• 建议最低用量A液6滴，B液2滴。